1. 預(yù)期用途

NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒16 型標(biāo)準(zhǔn)品用于 HPV 16 型 (HPV16) DNA 的第一個國際標(biāo)準(zhǔn)基于核酸的測定由冷凍干燥的制備物組成含有全長 HPV16 DNA 的重組質(zhì)粒 pBR322 被克隆通過其獨特的 BamH1 站點 (Quint et al., 2006)。該標(biāo)準(zhǔn)已在純化的人類基因組 DNA 的背景下配制，凍干在 0.5 ml 等分試樣中并儲存在 -20 °C。材料經(jīng)過校準(zhǔn)涉及 19 個實驗室的國際合作研究（Wilkinson 等人，2010）。國際標(biāo)準(zhǔn)包含的材料是專有的第三方，應(yīng)僅用于內(nèi)部校準(zhǔn)或HPV-16擴(kuò)增檢測的工作標(biāo)準(zhǔn)脫氧核糖核酸。國際標(biāo)準(zhǔn)不應(yīng)用于任何其他用途，使用后應(yīng)丟棄。

2. 注意
NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒16 型標(biāo)準(zhǔn)品不適用于人類食物鏈中的人類或動物。

該材料含有源自 C33A 細(xì)胞的 DNA。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應(yīng)包括戴防護(hù)手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應(yīng)小心謹(jǐn)慎，以免割傷。

3. 單元

HPV16 DNA 的第一個國際標(biāo)準(zhǔn)（NIBSC 代碼 06/202）已規(guī)定為每安瓿 5 x 10^6 國際單位 (IU) 的單位。

可追溯性聲明：

在 2008 年 1 月的一次 WHO 會議上（WHO 會議報告，2008 年）提出，HPV16 DNA 國際標(biāo)準(zhǔn)的使用說明包括用于確定所用散裝材料的理論 HPV16 基因組當(dāng)量 (GEq) 的計算和假設(shè)在制定國際標(biāo)準(zhǔn)時，證明 1 IU 相當(dāng)于 1 GEq 用于 HPV16 DNA。因此，第一個 WHO HPV16 DNA 國際標(biāo)準(zhǔn)的最終統(tǒng)一仍然是 IU，而可追溯性聲明將允許用戶將 IU 等同于 GEq。

在新墨西哥大學(xué) (UNM) 的 Cosette Wheeler 博士的實驗室中進(jìn)行了重組 HPV16 質(zhì)粒儲備制劑的 DNA 濃度測定。 DNA濃度通過260 nm處的吸光度以及使用Picogreen測定法（Invitrogen Corporation，USA）的分光熒光法測定。在兩次 DNA 測量之間獲得了 0.95 或更高的相關(guān)系數(shù)。將 10 ng HPV16 質(zhì)粒 DNA/μl 提供給 NIBSC 用于配制用于隨后冷凍干燥的散裝材料。 UNM 實驗室還向 NIBSC 提供了一份聲明，表明 HPV16 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.17 ng/μl。因此，10 ng HPV-16 質(zhì)粒 DNA/μl 質(zhì)粒儲備液相當(dāng)于 8.547 x 1011 HPV-16 GEq/ml。 NIBSC 在制定第一國際標(biāo)準(zhǔn)時使用了這些數(shù)據(jù)

用于 HPV 16 型 DNA。

用于 HPV 16 型 DNA 的NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒16 型標(biāo)準(zhǔn)品的散裝材料配方：

在 NIBSC，根據(jù)公式制備大量 HPV16 質(zhì)粒 DNA 材料：

HPV GEq/ml 散裝材料 = (HPV GEq/ml 質(zhì)粒原液 x 體積質(zhì)粒原液)/體積散裝材料。

因此，HPV16 GEq/ml 散裝材料 = (8.547 x 1011 HPV-16 GEq/ml 質(zhì)粒原液）x（0.02223 ml HPV-16 質(zhì)粒原液）/1900 ml HPV-16 散裝材料 = 1.0 x 107 HPV-16 GEq/ml散裝材料 HPV-16 DNA 散裝材料隨后以 0.5 ml 等分試樣冷凍干燥。

第一次將 IU 等同于 GEq 需要某些假設(shè)HPV16 DNA 的國際標(biāo)準(zhǔn)：

1) HPV16 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.17 ng/μl。

2) 凍干后 HPV16 DNA 的活性沒有損失。

3) 重組HPV-16質(zhì)粒DNA準(zhǔn)確模擬了生物樣本中HPV16病毒DNA的活性。

獨立計算重組 HPV-16 質(zhì)粒的 GEq/ml脫氧核糖核酸。NIBSC 還使用 BioEdit 序列比對編輯器 v7.0.5.3 (Tom Hall, Isis 制藥公司，美國）。用于確定分子量的序列是用于 pBR322 的 GenBank 登錄號 J01749.1 和用于 HPV16 的參考序列（登錄號 K02718）。